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組培污染是指在組培過(guò)程中，由于真菌、細(xì)菌等微生物的污染，在培養(yǎng)容器內(nèi)滋生大量的菌斑，培養(yǎng)材料不能正常生長(zhǎng)和發(fā)育的現(xiàn)象。

細(xì)菌污染的特點(diǎn)是菌斑呈粘液狀物，在接種兩三天即可觀(guān)察的到。

真菌污染的特點(diǎn)是污染部分長(zhǎng)有不同顏色的霉菌，在接種后一周內(nèi)即可觀(guān)察到明顯的菌絲生長(zhǎng)。

造成污染的原因及對(duì)策：

1、外植體消毒不徹底，材料帶菌

    外植體經(jīng)過(guò)滅菌后，并不一定完全將微生物殺死，有相當(dāng)多的材料仍是帶菌的，這些個(gè)體在培養(yǎng)幾天后就開(kāi)始長(zhǎng)菌，需要及時(shí)地進(jìn)行檢查和淘汰。智科組培建議您在做外植體時(shí)首先要選擇合適的消毒劑和消毒時(shí)間，盡可能的將外植體處理干凈。其次是試驗(yàn)盡可能的每瓶接種1個(gè)材料，這樣會(huì)降低交叉感染的概率。另外在種源有限時(shí)，也可對(duì)污染的材料采取二次滅菌的辦法，但滅菌時(shí)間和消毒劑需根據(jù)前期試驗(yàn)記錄和材料的狀態(tài)進(jìn)行調(diào)整。最后，對(duì)于部分難消毒的材料可以考慮使用抑菌劑進(jìn)行處理以提高成功概率。

2、培養(yǎng)基或者操作器具滅菌不徹底

    分裝完的培養(yǎng)基需要在121℃消毒20min左右，此過(guò)程中的滅菌效果取決于滅菌時(shí)的溫度及高溫持續(xù)的時(shí)間。如果出現(xiàn)滅菌溫度不夠或高溫持續(xù)時(shí)間不夠，在培養(yǎng)基表面往往會(huì)產(chǎn)生細(xì)菌性的污染。因此在使用高溫壓力容器進(jìn)行滅菌時(shí)，應(yīng)該設(shè)定好相應(yīng)的參數(shù)，并全程觀(guān)察各參數(shù)是否正常，出現(xiàn)異常情況要及時(shí)找出問(wèn)題所在，避免造成損失。另外如果是小型手動(dòng)滅菌設(shè)備，一定要根據(jù)要求嚴(yán)格執(zhí)行手動(dòng)排氣程序，杜絕因人為失誤造成的污染。最后如果條件允許，最好將滅完菌的培養(yǎng)基置于潔凈的房間內(nèi)放置3--5天觀(guān)察無(wú)污染后再使用。

接種用的器具除了使用前要經(jīng)過(guò)高溫滅菌外，在接種的過(guò)程中，每使用一次，需要及時(shí)利用器械滅菌器、酒精燈火焰等進(jìn)行滅菌處理。

3、接種過(guò)程中人員操作引起的污染

    在接種過(guò)程中因人為的因素引起污染的情況比較常見(jiàn)，而且有時(shí)候會(huì)造成比較嚴(yán)重的后果。人為因素引起的污染主要體現(xiàn)在個(gè)人衛(wèi)生、接種手法、無(wú)菌理念等多方面影響。首先接種人員應(yīng)注意個(gè)人衛(wèi)生，特別是手要認(rèn)真清洗，并用75％酒精進(jìn)行消毒，在接種的過(guò)程中，不要觸碰無(wú)關(guān)物品且還要經(jīng)常用酒精擦手。其次，接種人員應(yīng)當(dāng)熟練掌握操作技術(shù)，做到操作嫻熟。同時(shí)在接種過(guò)程手不要在滅過(guò)菌的接種用具和揭開(kāi)的培養(yǎng)瓶上方移動(dòng)，插苗時(shí)，要將瓶子適當(dāng)傾斜，以避免手上的微生物垂直落人瓶子內(nèi)。再次，應(yīng)嚴(yán)守?zé)o菌操作理念對(duì)于需要繼代轉(zhuǎn)接的培養(yǎng)物，放人超凈工作臺(tái)之前，要用酒精擦拭，在操作區(qū)內(nèi)，不要放入過(guò)多的待用培養(yǎng)基，避免潔凈的空氣流被遮擋。（請(qǐng)參閱 《潔凈組培室日常人員管理及要求》 ）

4、環(huán)境因素引起的污染

    組培過(guò)程中，由環(huán)境因素造成的污染也不容小覷。這也是凈化工程在組培上推廣的主要原因。環(huán)境因素主要包括環(huán)境濕度、環(huán)境污染源、空間消毒等幾個(gè)方面。首先，應(yīng)將環(huán)境濕度控制在60%---70%，如果濕度過(guò)大，應(yīng)該使用除濕機(jī)進(jìn)行除濕處理（此點(diǎn)對(duì)于南方梅雨季節(jié)時(shí)尤為重要）。其次是污染源的控制，應(yīng)嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)室及周?chē)�的粉塵。根據(jù)菌塵共生理論控好塵埃的量就會(huì)控制好環(huán)境中菌落的含量。另外對(duì)于污染的組培材料，絕不能就地清洗，否則會(huì)引起大量的真菌孢子在空氣中彌漫和繁殖。必須在高壓滅菌鍋內(nèi)，徹底殺死各種微生物后再進(jìn)行清洗。最后，要定期對(duì)空間進(jìn)行消毒，一般使用組培專(zhuān)用臭氧發(fā)生器進(jìn)行空間消毒處理。也可使用高錳酸鉀和福爾馬林進(jìn)行熏蒸，這種方法效果也不錯(cuò)，但對(duì)人體有一定的危害。此外實(shí)驗(yàn)室整體的衛(wèi)生管理也是必不可少的工作。

5、超凈工作臺(tái)造成的污染

    這種情況一般不常見(jiàn)，但確有個(gè)例發(fā)生。因此我們需要定期對(duì)初過(guò)濾器進(jìn)行清洗和更換（建議根據(jù)使用環(huán)境3---6個(gè)月清洗或更換一次），對(duì)內(nèi)部的超凈過(guò)濾器，不必經(jīng)常更換（初效過(guò)濾器按規(guī)定操作的話(huà)，理論上3---5年更換一次）。但保險(xiǎn)起見(jiàn)需要每隔一定時(shí)間進(jìn)行一次菌落試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)問(wèn)題及時(shí)更換。另外在每次使用時(shí)應(yīng)提前15～20min開(kāi)風(fēng)機(jī)和紫外進(jìn)行預(yù)處理，并對(duì)操作臺(tái)面用75％的酒精進(jìn)行噴霧消毒。

    以上是造成組培污染的一些常見(jiàn)問(wèn)題和解決措施，當(dāng)然造成組培污染的因素絕不僅僅是這幾種。組培的污染是多方面問(wèn)題，諸如像是瓶蓋沒(méi)有仔細(xì)清洗這樣細(xì)節(jié)的不注意最后都可能會(huì)造成巨大的損失。因此智科組培在此提醒您應(yīng)該將無(wú)菌操作理念貫穿于整個(gè)組培操作流程中，仔細(xì)、仔細(xì)再仔細(xì)的將污染防控做到實(shí)處，以避免不必要的損失。

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