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甘薯脫毒種苗-甘薯原原種的繁育
發(fā)表時間:2018-8-25 14:30:29 閱讀:6334

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       甘薯(學(xué)名:Dioscorea esculenta (Lour.) Burkill):又名甜薯,旋花科薯蕷屬纏繞草質(zhì)藤本植物。為我國主要栽培作物之一,是飼料和輕工業(yè)制品的重要原料,我國甘薯的種植面積常年保持在7500-8000萬畝以上,占全國耕地總面積的4.2%,總產(chǎn)量超過1億噸,是世界上最大的甘薯生產(chǎn)國。因此提高甘薯單位面積產(chǎn)量對我國甘薯的生產(chǎn)具有重要的現(xiàn)實意義。近些年來,由于甘薯病害的影響,甘薯的增產(chǎn)幅度降低,某些地區(qū)甚至出現(xiàn)了甘薯產(chǎn)量大幅下降的現(xiàn)象,研究表明,甘薯病毒病的危害是主要的原因,感染病毒后的甘薯表現(xiàn)為:薯塊變小,品質(zhì)變差,產(chǎn)量下降等癥狀。這些表現(xiàn)與甘薯的生物學(xué)特性和病毒的寄生有關(guān),甘薯為無性繁殖作物,品質(zhì)的遺傳特性是靠薯塊代代傳遞的,薯塊中大量的營養(yǎng)物質(zhì)和水分,即為世代的繁衍提供了重要的營養(yǎng)物質(zhì),也為病毒的生存和繁殖提供了養(yǎng)分。要防治甘薯病毒病的危害,最根本的辦法是除掉薯塊中存在的病毒,獲取無病毒植株。

一、甘薯病毒病

1、甘薯病毒病的癥狀

      甘薯病毒病癥狀與毒原種類、甘薯品種、生育階段及環(huán)境條件有關(guān)。主要有以下幾種表現(xiàn):

• 葉片褪綠斑點型苗期及發(fā)病初期葉片產(chǎn)生明脈或輕微褪綠半透明斑,生長后期,斑點四周變?yōu)樽虾稚蛐纬勺檄h(huán)斑,多數(shù)品種沿脈形成紫色羽狀紋。

• 花葉型苗期染病初期葉脈呈網(wǎng)狀透明,后沿葉脈形成黃綠相間的不規(guī)則花葉斑紋。

• 卷葉型葉片邊緣上卷,嚴(yán)重時卷成杯狀。

• 葉片皺縮型病苗葉片少,葉緣不整齊或扭曲,有與中脈平行的褪綠半透明斑。

• 葉片黃化型形成葉片黃色及網(wǎng)狀黃脈。

• 薯塊龜裂型薯塊上產(chǎn)生黑褐色或黃褐色龜裂紋,排列成橫帶狀或貯藏后內(nèi)部薯肉木栓化,剖開病薯可見肉質(zhì)部具黃褐色斑塊。

2、侵染甘薯的病毒類型

      目前全世界已報道的甘薯病毒有十幾種,在我國主要以甘薯羽狀斑駁病毒(SPFMV)、甘薯潛隱病毒(SPLV)和甘薯退綠斑病毒(SPCFV)危害最重。在中華人民共和國行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《甘薯脫毒種薯 NY T 1200-2006》中明確規(guī)定甘薯脫毒試管苗不得檢出上述三種病毒。

      甘薯羽狀斑駁病毒(SPFMV),此病毒主要侵染旋花科甘薯屬植物。為線狀病毒,病毒粒體長度為830-850nm,基因組為單鏈RNA,可通過汁液摩擦、嫁接方式進行傳播,并可經(jīng)蚜蟲(桃蚜和棉蚜)以非持久性方式傳播,常與其他病毒共同存在,復(fù)合感染。

SPFMV侵染甘薯產(chǎn)生的癥狀可因寄主、環(huán)境條件以及株系的不同而不同。一般造成褪綠斑或具紫邊的不明顯或明顯的褪綠斑(紫環(huán)斑),也可沿葉脈形成紫色羽狀斑紋。癥狀主要在老葉上可觀察到,有時也有隱癥侵染現(xiàn)象。此病毒部分株系可在某些甘薯品種表面或內(nèi)部形成褐色龜裂或木栓化。在指示植物上觀察到的主要癥狀是明脈、沿脈變色、褪綠斑以及中脈扭曲等癥狀。但癥狀可以很輕微,而且最早萌發(fā)的葉片可能無癥狀,不同葉位表現(xiàn)的癥狀也不相同。

      甘薯潛隱病毒(SPLV),此病毒首次發(fā)現(xiàn)于我國臺灣省,病毒粒子為彎曲長桿狀,長約700~750nm,此病毒主要通過汁液摩擦接種傳播,蚜蟲和白粉虱都不能傳播此病毒。被此病毒侵染的甘薯品種多數(shù)并不產(chǎn)生明顯的葉部癥狀,只產(chǎn)生輕度的斑駁。該病在苗床期和大田生長期均可發(fā)生。一般苗床期癥狀輕微或不明顯。而夏季高溫時癥狀消失呈隱癥現(xiàn)象,秋后隨著溫度的降低,癥狀又重新出現(xiàn),常見的有局部褪綠斑駁(黃綠相間、深綠與淺綠相間的花葉);葉片小,葉面皺縮不平。嚴(yán)重的在葉片上有庖斑。

      甘薯退綠斑病毒(SPCFV),此病毒屬于長線病毒科毛形病毒屬成員。最早報道于20世紀(jì)70年代,主要分布在亞洲和南美洲。其單獨侵染甘薯時產(chǎn)生的癥狀比較輕微,表現(xiàn)為葉片褪綠、植株矮化、中下部葉片變紫色或黃化,通?墒垢适頊p產(chǎn)50%。

二、莖尖分生組織脫毒培養(yǎng)

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1、催芽取材

       在進行莖尖脫毒之前,我們應(yīng)該首先進行品種的選擇。品種必須是在當(dāng)?shù)貜V泛種植,有一定的種植年限,品質(zhì)優(yōu)良,產(chǎn)量穩(wěn)定、適應(yīng)性好、品質(zhì)純度高的品種。關(guān)于取材有兩種方法:一是在甘薯的生長季節(jié)在大田進行取材,頂芽和腋芽均可。二是利用薯塊進行人工催芽的方式進行。由于前者存在消毒不徹底、污染率低、病毒去除不徹底的問題,所以往往采用后者進行材料的獲取。具體辦法為將洗凈的高溫處理過的薯塊排好在沙床中發(fā)芽,待芽長至3-5cm時,即可切取莖芽分生組織。

2、消毒接種

       切取1-2cm長的頂端組織,在流動的自來水下沖洗1-2小時,然后使用75%的酒精浸泡10-20s,無菌水沖洗一次,接下來使用0.1%的升汞溶液浸泡5-8min,最終使用無菌水沖洗3-5次。將消過毒的材料置于解剖鏡下,使用解剖針剝?nèi)ネ獠坑兹~及大的葉原基,切取帶有1-2個葉原基的、長度為0.3-0.4mm的莖尖分生組織,迅速接種到預(yù)先準(zhǔn)備好的培養(yǎng)基中。

3、培養(yǎng)再生

       將接種好的莖尖分生組織置于25±2℃、光照3000-5000lux、光照時間為12-14小時的環(huán)境下進行培養(yǎng)。大約15-20天后,肉眼可見白色生長點發(fā)芽轉(zhuǎn)綠,此時將發(fā)芽轉(zhuǎn)綠的莖尖組織轉(zhuǎn)移到不含任何激素的MS培養(yǎng)基上進行培養(yǎng),經(jīng)過50天左右的培養(yǎng)后,可以得到5-6片葉片的幼苗。接下來進行同莖尖株系切段繁殖,并對同一株系的植株同一編號,以免混雜。

4、病毒檢測

       甘薯脫毒苗的病毒檢測主要使用酶聯(lián)免疫檢測法和指示植物法。可以自行購置設(shè)備進行自檢也可以委托第三方進行檢測,關(guān)于檢測的方法與步驟,本方案不再詳述。

對于酶聯(lián)免疫法檢測結(jié)果顯陽性的株系,要全部舍棄不可繼續(xù)保留。對于檢測結(jié)果顯陰性的株系,繼續(xù)保留進行快繁。經(jīng)酶聯(lián)免疫和指示植物共同顯示沒有問題的種苗才可確定為無病毒苗。無病毒種苗還需要進行種性的鑒定,種性鑒定沒問題的株系可以混合在一起進入無性快繁階段。

5、無性快繁

       利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)將病毒檢測、種性鑒定沒問題的種苗進行瓶內(nèi)擴繁。計算好出苗時間和數(shù)量,選擇好合適的培養(yǎng)基,控制好培養(yǎng)環(huán)境以減低污染苗的出現(xiàn)。待數(shù)量達到預(yù)期值,即可擇機出苗。

三、甘薯原原種的繁育

1、場地選擇

       生產(chǎn)甘薯原原種必須要在隔離防蟲網(wǎng)棚內(nèi)進行。防蟲網(wǎng)棚是繁育原原種的重要條件之一,且所用防蟲網(wǎng)的網(wǎng)眼必須在40目以上,這樣蚜蟲就不能通過可以大大減少蚜蟲傳播病毒的機會。同時所用地塊必須是無病原土壤,最好選用多年未栽種過甘薯的土壤。

2、種苗定植

       在3月中旬將5-7片葉的脫毒試管苗打開瓶口,室溫下加光照煉苗5-7天。栽前頭天下午在棚內(nèi)苗圃上撤上用100克40%樂果乳油加水2.5-5千克稀釋后與15-25千克干餌料拌成的毒餌,以消滅地下害蟲。因防蟲網(wǎng)棚內(nèi)光照較弱,通風(fēng)透氣性較差,很容易造成旺長。因此,繁殖原原種時,栽插密度不易太高,一般以每畝4000株為宜。

3、種苗管理

       在繁育甘薯原原種的過程中,要始終貫穿防止病毒再侵染的意識。在網(wǎng)棚內(nèi)種植一些指示植物,每1-2個星期噴灑1次防治蚜蟲的藥劑。最好是多種藥劑輪換使用,以免蚜蟲產(chǎn)生抗藥性,達不到防治效果。 原原種收獲時要逐株觀察是否有病毒癥狀,一旦發(fā)現(xiàn)病株要堅決拔除,以確保原原種質(zhì)量。如果網(wǎng)棚內(nèi)所種植的指示植物表現(xiàn)病毒癥狀,整個棚內(nèi)所繁殖的種薯應(yīng)降級使用。

 

四、原原種薯收獲與儲存

1、當(dāng)?shù)販胤(wěn)定在15℃時,適時收獲。剔除病、爛等無種用價值的塊根,不同品種單收單放,不可混雜。

2、使用編織袋包裝并懸掛識別標(biāo)簽(品種、級別等信息)。

3、運輸過程中,應(yīng)防止機械碰傷、防雨、防凍害。

4、入窖20天內(nèi)要注意排濕、降溫,溫度降至13-15℃,相對濕度95%以下。

5、入窖20天后,保持窖溫12-14℃,不低于10℃,相對濕度保持在85-90%。可以在薯堆上覆蓋草簾等吸濕物。

6、儲存期間注意防止鼠害。

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