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在自然環(huán)境中采集的外植體表面會攜帶大量的微生物，如果處理不當(dāng)會造成培養(yǎng)基污染，進(jìn)而造成培養(yǎng)失敗。因此在合適的季節(jié)、合適的母株、選擇好合適的外植體材料后需要對其進(jìn)行相應(yīng)滅菌處理。

一、組培中常用的消毒試劑及滅菌效果

二、消毒方法

（一）、流水沖洗，將采集來的植物材料除去不用的部分，把材料切割成適當(dāng)大小，即滅菌容器能放入為宜。置自來水龍頭下流水沖洗1---2小時（可以加入吐溫等表面活性劑提高清洗效果），沖洗時間視材料清潔程度而定。易漂浮或細(xì)小的材料，可裝入紗布袋內(nèi)沖洗。流水沖洗在材料污染嚴(yán)重時特別有用。

（二）、材料滅菌，在超凈工作臺上，首先使用酒精對待處理的材料進(jìn)行表面浸潤（由于酒精的穿透力強，不同的材料應(yīng)注意控制浸潤的時間）。然后使用選定的殺菌劑進(jìn)行材料的滅菌處理。不同的材料、不同的滅菌劑滅菌是時間不同。應(yīng)該通過試驗進(jìn)行摸索調(diào)整。具體操作程序為：

把流水沖洗過的材料轉(zhuǎn)放到已滅菌的培養(yǎng)瓶中，然后倒入選好的消毒溶液，輕輕攪動培養(yǎng)瓶，促進(jìn)材料各部分與消毒溶液充分接觸，驅(qū)除氣泡，使消毒徹底。到時間后把消毒液倒入已準(zhǔn)備好的容器內(nèi)，要注意不要使材料倒出，傾凈后立即倒入無菌水，輕攪涮洗。根據(jù)材料及選用的消毒液決定沖洗時間和次數(shù)。

（三）、無菌水沖洗

使用事先準(zhǔn)備好的無菌水對材料進(jìn)行涮洗，涮洗時間為每次2---5min左右，同時視采用的消毒液種類，涮洗3-l0次左右（對于容易去除的消毒液沖洗3---5次即可，對于較難去除的消毒液應(yīng)沖洗8---10次）。無菌水涮洗作用是免除消毒劑殺傷植物細(xì)胞的副作用。

三、注意事項：

1、滅菌時間是指從倒人消毒液開始，至倒入無菌水時為止。一定要記錄時間以便于比較消毒效果及以后試驗條件的調(diào)整。

2、有時需要在滅菌溶液中加吐溫-80等表面活性劑，這些表面活性劑主要作用是使藥劑更易于展布，更容易浸人到滅菌的材料表面。但加入后對材料的傷害也在增加，一定要注意用量和滅菌時間，一般來講表面活性劑加入滅菌液的量不得超過0.6%。

3、酒精的滲透性很強，幼嫩的材料容易在酒精中失綠，所以浸泡時間不可過長，防止酒精殺死植物的組織細(xì)胞。

4、除氯化汞可短期內(nèi)貯用外。其他滅菌劑應(yīng)在使用前現(xiàn)配現(xiàn)用。

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