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植物組培培養(yǎng)基-有機(jī)化合物(organic compound)
發(fā)表時(shí)間:2018-8-2 11:29:18 閱讀:4692

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1、碳水化合物  

       糖在組培中的作用是提供C源并維持一定的滲透壓,無論是哪種培養(yǎng)基配方均需加入一定量的糖,適宜的糖濃度對(duì)器官的發(fā)生很重要,不同的品種及外植體的誘導(dǎo)和分化,需要不同種類及不同濃度的糖,葡萄糖、果糖、蔗糖、可溶液性淀粉都可以作為組培的碳源,但通過對(duì)20多種糖作為碳源對(duì)不同植物的愈傷組織形成和生長的研究表明,對(duì)多數(shù)植物來講,蔗糖和葡萄糖是良好的碳源,使用濃度一般為2%~3%,常用3%,即配制一升培養(yǎng)基稱取30g蔗糖,有時(shí)可用2.5%。在誘導(dǎo)花藥愈傷組織或胚培養(yǎng)時(shí),往往采用4%-15%的高濃度。在實(shí)際應(yīng)用中,用白糖代替蔗糖,未見明顯的差異,大規(guī)模生產(chǎn)時(shí)從經(jīng)濟(jì)和節(jié)約的角度出發(fā),白糖的使用更為廣泛。

       由于糖具有維持滲透壓的功效,所以及時(shí)轉(zhuǎn)移材料到新鮮的培養(yǎng)基上也是非常重要的,否則會(huì)引起萎蔫和死亡。在香石竹的組培中當(dāng)糖用量提高時(shí),一方面會(huì)增加生產(chǎn)成本,另一方面隨著糖濃度的增加,香石竹的生長受到抑制,濃度越高,抑制作用越強(qiáng),當(dāng)糖濃度達(dá)6%-8%時(shí),嫩梢葉片開始翻卷增厚,呈現(xiàn)明顯的形態(tài)異常,并出現(xiàn)較輕的萎蔫狀,并伴有玻璃化發(fā)生;濃度達(dá)9%-11%時(shí),培養(yǎng)20d,嫩梢開始死亡,腋生梢的發(fā)生量也隨糖濃度的增加而減少,3%時(shí)為1.9個(gè),5%時(shí)為1.4個(gè),7%時(shí)為0.9個(gè)。同樣,高濃度的糖也會(huì)抑制百合產(chǎn)生小鱗莖,糖濃度為3%時(shí),莖尖外植體可以100%的產(chǎn)生小鱗莖,在9%時(shí),28個(gè)莖尖只有3個(gè)產(chǎn)生了小鱗莖,其余的形成愈傷組織。

       不同糖類對(duì)生長的影響不同。從各種糖對(duì)水稻根培養(yǎng)的影響來看,以葡萄糖效果最好,果糖和蔗糖相當(dāng),麥芽糖差一些。不同植物不同組織的糖類需要量也不同,實(shí)驗(yàn)時(shí)要根據(jù)配方規(guī)定按量稱取,不能任意取量。高壓滅菌時(shí),會(huì)使一部分蔗糖發(fā)生分解生成葡萄糖和果糖,制定配方時(shí)要給予考慮

2、維生素(vitamin)

       維生素類化合物在植物細(xì)胞里主要是以各種輔酶的形式參與多種代謝活動(dòng),對(duì)生長、分化等有很好的促進(jìn)作用。維生素對(duì)植物新陳代謝過程的影響很大,它對(duì)形態(tài)發(fā)生的影響主要是由于影響到基礎(chǔ)的生物化學(xué)代謝而產(chǎn)生的。雖然大多數(shù)的植物細(xì)胞在培養(yǎng)中都能合成所必需的維生素,但在數(shù)量上,還明顯不足,通常需加入一種到數(shù)種維生素,以便獲得最良好的生長。組培上常用的主要有VB1(鹽酸硫胺素)、VB6(鹽酸吡哆醇)、Vpp(煙酸)、Vc(抗壞血酸)、有時(shí)還使用生物素、葉酸、VB12等。一般用量為0.1-1.0 mg·L-1。有時(shí)用量較高。VB1對(duì)愈傷組織的產(chǎn)生和生活力有重要作用,VB6能促進(jìn)根的生長,Vpp與植物代謝和胚的發(fā)育有一定關(guān)系。Vc有防止組織變褐的作用。許多植物能自行合成必需的維生素,在營養(yǎng)需求未知時(shí),加入酵母提取物的主要目的也是在于補(bǔ)充維生素。

3、肌醇  (myo-inosltol)

       肌醇又叫環(huán)己六醇,在糖類的相互轉(zhuǎn)化中起重要作用。通常可由磷酸葡萄糖轉(zhuǎn)化而成,還可進(jìn)一步生成果膠物質(zhì),用于構(gòu)建細(xì)胞壁。肌醇與6分子磷酸殘基相結(jié)合形成植酸,植酸與鈣、鎂等陽離子結(jié)合成植酸鈣鎂,植酸可進(jìn)一步形成磷脂,參與細(xì)胞膜的構(gòu)建。使用濃度一般為50-100 mg·L-1,適當(dāng)使用肌醇,能促進(jìn)愈傷組織的生長以及胚狀體和芽的形成。對(duì)組織和細(xì)胞的繁殖、分化有促進(jìn)作用,對(duì)細(xì)胞壁的形成也有作用。

4、氨基酸(almino acide) 

       氨基酸類是很好的有機(jī)氮源,可直接被細(xì)胞吸收利用。培養(yǎng)基中最常用的氨基酸是甘氨酸。有時(shí)應(yīng)用水解乳蛋白或水解酪蛋白,它們是牛乳用酶法等加工的水解產(chǎn)物,是含有約20種氨基酸的混合物,用量在10-1000mg/L之間。甘氨酸能促進(jìn)離體根的生長,對(duì)植物組織培養(yǎng)物的生長也有良好的促進(jìn)效果,通常用量為2-3 mg·L-1。絲氨酸和谷氨酰胺有利于花藥胚狀體或不定芽的分化。水解酪蛋白(CH)和水解乳蛋白(LH)也是多種氨基酸的混合物,對(duì)胚狀體或不定芽或多胚的分化有良好的促進(jìn)作用,通常用量為500 mg·L-1。酪氨酸可不同程度的替代水解酪蛋白或水解乳蛋白的作用。但是由于它們營養(yǎng)豐富,極易引起污染。如在培養(yǎng)中無特別需要,建議不要使用。

5、腺嘌呤

       許多研究報(bào)告指出腺嘌呤及其硫酸鹽具有促進(jìn)芽分化的良好效果,對(duì)出芽難的植物可以試用,它是合成細(xì)胞分裂素的前提之一,所有細(xì)胞分裂素都含有腺嘌呤,或者說腺嘌呤帶有不同側(cè)鏈及其堿基,就構(gòu)成了不同種類的細(xì)胞分裂素,因此,它可能在植物組織分化時(shí)形成細(xì)胞分裂素而起作用。

6、天然復(fù)合物  

       此類化合物其成分比較復(fù)雜,大多含氨基酸、激素、酶等一些復(fù)雜化合物。它對(duì)細(xì)胞和組織的增殖與分化有明顯的促進(jìn)作用,但對(duì)器官的分化作用不明顯。它的成分大多不清楚,所以非必需一般不建議使用。

(1)、椰乳 

       椰乳是椰子的液體胚乳。它是使用最多、效果最大的一種天然復(fù)合物。一般使用濃度在10%—20%,與其果實(shí)成熟度及產(chǎn)地關(guān)系也很大。它在愈傷組織和細(xì)胞培養(yǎng)中有促進(jìn)作用。在馬鈴薯莖尖分生組織和草莓微莖尖培養(yǎng)中起明顯的促進(jìn)作用,但莖尖組織的大小若超過1mm時(shí),椰乳就不發(fā)生作用。

(2)、香蕉  

       一般是使用打碎的香蕉泥,用量為150-200ml/L。用黃熟的小香蕉,加入培養(yǎng)基后變?yōu)樽仙。?duì)pH值的緩沖作用大。主要在蘭花的組織培養(yǎng)中應(yīng)用,對(duì)發(fā)育有促進(jìn)作用。

(3)、馬鈴薯  

       馬鈴薯去掉皮和芽后,加水煮30min,再經(jīng)過過濾,取其濾液使用,用量為150-200g/L,對(duì)pH值緩沖作用也大。添加后可得到健壯的植株。

(4)、其他 

       酵母提取液(YE)(0.01%-0.05%),主要成分為氨基酸和維生素類;麥芽提取液(0.01%~0.5%)、蘋果和番茄的果汁、黃瓜的果實(shí)、未熟玉米的胚乳等,遇熱較穩(wěn)定,大多在培養(yǎng)困難時(shí)使用,有時(shí)有效。

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